CRISPR-Cas9 기반 체세포 편집물의 Off-target 효과 최소화를 위한 Cas 단백질 변이체 라이브러리 구축 전략

Off-target 효과는 CRISPR 유전자 편집 기술의 주요 난제로, 목표 서열과 유사하지만 실제로는 원치 않는 게놈 부위를 절단하는 현상을 의미합니다.

최소화 기법 및 분석

• Cas 단백질 자체의 구조적 변형(예: PAM 인식 부위 수정, 단백질 치환)을 통해 특정 서열에 대한 결합 특이성(Specificity)을 향상시키는 Directed Evolution 접근법이 사용됩니다.
• 편집 효율과 특이성을 동시에 평가하기 위해, 다양한 변이체 라이브러리를 대상으로 차세대 염기서열 분석 기반의 광범위한 Genome-wide off-target screening을 수행합니다.

이러한 방법론은 정밀의료 및 기초 연구에서 안전성을 확보하며 원하는 유전자 기능을 정확히 조작하는 데 필수적이며, 생물정보학적 모델링을 통해 잠재적 위험 지역을 선별합니다.